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[레포트] [식물생리학]제한효소 DNA 절단과 전기영동법과 PCR에 의한 DNA분리 및 확인

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작성일18-06-14 09:33

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- 제한효소가 인식하는 염기서열은 보통 4-6개의 뉴클레오타이드로 구성되어져
있따
- 플라스미드나 파아지와 같은 벡터에 특정 DNA의 일부를 삽입시키는데 이용된다
- 특정한 유전자 서열을 절단한 후 벡터를 만들어 숙주 박테리아에 도입시키는데
이용된다
- 이러한 작업들은 유전자 클로닝 과definition 한 부분이다. 이런 역할을 하는
효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각
exonulease, endonuclease라고 부른다.
- 일정한 움를 잘나냄으로써 움 절편의 양상을 觀察(관찰) 하는데 이용된다
- 제한효소에 의해 절단된 DNA 부위를 표시한 제한지도를 만드는데 사용되기도
한다.) Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소이며,
DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에
존재하는 특government 위를 절단한다.

2. experiment(실험) 원리

1) 제한 효소 (Restriction enzyme)

(1) 제한 효소의 definition
* 제한 효소는 DNA 분자의 특정 염기 배열을 인식하여 자르는 일종의 DNA용
가위이다.

1) TYPEⅠ 제한효소
- DNA 특government 위를 인식하지만 인식부위가 아닌 부위를 절단한다.
- 인식부위의 구조는 palindrome 구조이다.

(2) 제한 효소에 대한 요약
- 분자 절단 가위라고 인식 할 수 있따
- 진핵세포 DNA의 클로닝 probe제작, DNA와 RNA 구조 分析(분석)에 이용된다
- 많은 종류의 박테리아 균주에서 천연적으로 발견된다
- 많은 효소들이 DNA 재조합 연구에 사용된다
- 이중 쇄 구조로 된 DNA의 특정한 염기서열을 인식하고 잘라낸다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해
들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는
것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기( adenine, cytosine)를 Methylation 시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있따 제한효소는 여러
종류가 있는데, 보통 DNA 상에서 4개 이상의…(drop) 대칭성 염기를 인식하면서 절단한다.

[DNA 제한 효소를 이용한 절단]


(3) 제한 효소의 분류

- 3가지 종류( TYPEⅠ, TYPEⅡ, TYPE Ⅲ)로 나누어진다.
- 인식부위로부터 1000bp 떨어진 부위를 절단한다.
- 유전자 DNA를 일정한 크기로 절단한다.
- 원하는 부위를 정확하게 절단하는데 어렵다. (대부분의 제한효소는 4쌍 또는 6쌍의
염기배열을 인식하여 자르는데, 제한효소에 의해 잘라지게 되면 양 끝이 상보적인
가닥이 되거나 밋밋한 부분으로 된다 만일 같은 제한효소로 잘린 DNA가닥을
만나면 상보적인 끝부분 때문에 재결합하기가 쉬운데, 이들을 연결해주는 역할을
하는 것이 리가아제이다.
- 분자 생물학적 연구에 주로 이용되는 제한효소들이다.
2) TYPEⅡ 제한효소
- 인식 부위와 절단 부위 모두 특이성을 나타낸다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
* palindrome 구조: 앞이나 뒤로 읽어


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실험결과/기타


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다.
- 4개에서 6개의 염기서열을 인식한다.

- DNA도 특정 부위를 절단할 수가 있는데 DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이
연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미한다.




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순서


1.experiment(실험) 목적

- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기 영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다.
- 인식부위는 특이성을 가진다.

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